【摘要】目的评价市售牙签的安全性。方法将市售牙签样品制备浸提液，以不同浓度作用于人挤静脉内皮 细胞，在不同时间段采用生物荧光检测试剂盒测定培养细胞的三磷酸腺苷,评价各种牙签的细胞毒性。电子游标 卡尺测量牙签直径。按GB15979 - 2002《一次性使用卫生用品卫生标准》进行微生物检测。扫描电镜下观察样品 表面光洁度。结果作用3、7、24 h后,半数以上样品浸提液在50.00%、25.00%浓度时对正常细胞具有显著 杀伤作用,部分样品12.50%、6.25%浓度仍对细胞有杀伤作用。浸提液pH值越低对细胞杀伤性越大。所检样 品未测出致病菌,个别样品存在微生物超标。所检样品均做工粗糙,直径过大,表面光洁度差。结论市售牙签 普遍存在生产粗糙、有害物残留过量的问题,其使用的安全性应引起牙科医生、消费者及有关部门的重视。

 

【关键词】牙签；口腔健康；安全性；三磷酸腺苷生物荧光检测法

 

【中图分类号】R780.1 【文献标识码】A 【文章编号】1006 - 5245(2008)11 -500 - 04

 

Detection of Biological Safety of Toothpicks in Market LI Yan-ning1, NONG Xiao-lin, LI Jia-quan, et al.

 

1 School of Public Health, Department of Epidemiology and Medical Statistics, Nanning 530021, China 【Abstract】 Objective To determine the healthy risks of toothpicks sold in the markets in Nanning, Guangxi province, PR China. Methods Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were exposed to culture medium with toothpick 数据ts at different concentrations and for different incubation periods. The cytotoxic effects of toothpick extracts on HUVEC were examined by a gtandard adenosine triphosphate bioluminesceno assay. Diameters of the toothpicks, tip were measured with digital vernier calipers. Microbes were examined according to standard microbiological criteria (GB15979-2002). Surface smooth and glossy of toothpick samples were observed under scanning electron microscope.

 

Results More than one half of the 11 inspected toothpick extractions killed HUVEC after 3, 7 or 24 hours treatment respectively in the 50. 00% and 25.00% concentrations. A few killed cells in concentration of 12. 50% and 6. 25%. The cytotoxic effect was related to the pH of the extracts，i.e., lower pH does more harm to the cells. Only 1 amongst 26 toothpick samples was found to exceed normal microbe counts and no pathogenic bacteria were founded in the examined samples. TTie tip of toothpicks in the markets is big and rough. Conclusion The quality of the toothpicks sold in the markets were poor in general. An immediate awareness and concern should come into the sights of dentists，consumers and relative authorities.

 

【Key words】 Toothpicks; Dental health; Safety； Adenosine triphosphate bioluminescence assay

牙签是日常卫生用具，但牙签的使用安全问题 却未受到重视。牙签在生产中多采用焦亚硫酸钠蒸 煮或硫磺熏蒸漂白，其残留物质有可能对牙龈乳头 上皮及牙周膜纤维造成化学损伤;过粗、表面粗糙的 牙签也可对牙龈、牙周造成机械损伤;细菌、霉菌超 标的牙签也可破坏牙周生物微环境的平衡。鉴于此，笔者拟对市售牙签中可能存在的生物安全隐患 进行研究，现报道如下。

 

材料和方法

 

1.牙签浸提液的细胞毒性检测

 

待测样品•.南宁市各大超市、农贸市场随机购买 收集的11种牙签样品和自制的天然竹签（由未经任 何加工的天然竹自然干燥后制备而成）。

 

(1)待测样品浸提液制备及pH值测定对各 样品的产地、商标、包装、材质、外观、质地、颜色、气 味进行记录。每种待测样品称取5 g，放于培养皿 中，再加人10 mL含100 u/mL青霉素，100 jig/mL 链霉素、10%血清的1640培养基，置4 "C冰箱24 h，收集浸提液，取2 mL用酸度计测定pH值,其余用

 

0.22 pm微量滤器过滤，装瓶，无菌保存。

 

(2)浸提液细胞毒性检测取人脐静脉内皮细 胞（human umbilical vein endothelial cell, HUVEC ) (中国科学院上海细胞生物学研究所提供），培养于 100 mL培养瓶，待细胞贴壁、生长融合后，0.25%胰 蛋白酶、0.02%乙二胺四乙酸消化细胞，10%血清 1640培养基稀释，按10 000个/孔接种于96孔培养 板,将培养板置于37 V , 5%C02细胞培养箱内培养 24 h,分别用浓度为 50. 00%、25.00%、12.50%、 6.25%的不同牙签浸提液置换原培养液，每个浓度 3个复孔。空白对照组为10%血清1640培养基。 培养期间观察细胞生长状态,动态了解细胞生长情 况。培养3、7、24 h后，采用生物荧光检测试剂盒 (北京金紫晶生物医药技术有限公司），对培养细胞 的三碟酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP)进行测 定。将荧光酶工作液加入到荧光酶-荧光素系统 中，溶解混合为发光工作液，室温避光放置10 min0 顺序将ATP提取液加人96孔细胞培养板，每孔加人 50 pL，室温静置5 min0自96孔培养板顺序吸出 50万L上清液，对应加入到96孔荧光测定板中。在 焚光测定板中每孔加入50 |xL发光工作液,在微量 振荡器上振荡10 s，立刻用MPL-1型自发光分析仪 (Berthold公司,德国）扫描。样品荧光值输入SPSS 软件包,采用重复测量的方差分析进行统计分析。

 

2.牙签直径的测量

 

电子开关数显游标卡尺（桂林广陆数字测控技 术有限公司）测量上述11种受试牙签距尖端

 

0.5 cm、1.0 cm处直径，每一样品测10根牙签。

 

3.微生物检测

 

南宁市各大超市、农贸市场随机购买收集26种 牙签样品，按GB 15979 -2002《一次性使用卫生用品卫生标准》进行微生物检测。在100级净化条件 下，无菌操作打开包装，准确称取10 g样品加入 50 mL灭菌洗脱液，充分振荡混匀，待自然沉降后， 吸取上清液,分别在营养琼脂培养基、沙堡氏培养 基、乳糖胆盐发酵管、伊红美兰平板、SCDLP培养基、 血琼脂平板上作细胞总数、霉菌总数检测,大肠杆菌 群、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌检测。

 

4.牙签表面光洁度的观察 取受试牙签常规制作扫描电镜标本，JE0L JSM-T300扫描电镜下观察样品表面情况。